一. 试剂盒组成、储存、稳定性:
产品目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
---|---|---|---|
PT002-10 | 2x Taq PCR Master Mix (含染料) | 10 x 1ml | ¥390 |
PT002-100 | 2x Taq PCR Master Mix (含染料) | 100 x 1ml | ¥3,500 |
二. 产品介绍:
本产品是由Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、PCR Buffer以及PCR稳定剂和增强剂组成的浓度为2×的预混体系。具有操作简单快捷,灵敏度高,特异性强,稳定性好等优点,并可最大限度地减少人为误差和污染。
本产品使用方便快捷,能避免 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Taq PCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。
2×Taq PCR Master Mix(含染料):已加入红色染料,反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。
2×Taq PCR Master Mix(不含染料):没有添加任何示踪染料,电泳时需要加含有示踪染料的上样缓冲液。
扩增的PCR产物3′端自动加“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。
产品主要成分:Taq DNA Polymerase (recombinant):0.1units/µl ;MgCl2: 4mM ;dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP):0.4mM
三. 产品特点:
独创的MasterMix配方使扩增产物得率高,重复性强,稳定性好,操作更加简单快捷,灵敏度高,特异性强,稳定性好。
四. 质量控制:
经检测无外源核酸酶活性,PCR方法检测无宿主残留DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因,室温放置一周,无明显活性改变;
五. 适用范围:
基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测,半定量PCR实验和微量DNA的检测。
DNA扩增和一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高(>60%),有二级结构等的扩增:DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定等。PCR产物带A,纯化后可直接用T/A载体克隆。
六. 使用方法:
以下举例仅供参考,实际反应条件因模板,引物等的结构不同而异,需根据实际情况,设置最佳反应条件。
1.实验方案:
用2xTaq PCR Mastermix,以人基因组DNA为模板,扩增1kb片段,反应体系25ul(如反应体系不同,可按此比例增加和减少用量)
2.PCR反应体系:
试剂 | 25µl反应体系 | 25µl反应体系 |
---|---|---|
2xTaq PCR MasterMix | 12.5µl | 25µl |
Forward Primer | 0.1-1µl | 2µl |
Reverse Primer | 0.1-1µl | 2µl |
Template DNA | 10pg-1µg | ﹤1µg |
RNase-free water(ddH2O) | Up to 25µl | Up to 50µl |
Note:引物浓度请以终浓度0.1-1.0uM作为设定范围的参考,扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度,发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
3.PCR反应条件:
步骤 | 温度 | 时间 | ||
---|---|---|---|---|
预变性 | 94℃ | 3min | ||
变性 | 94℃ | 30s | } | 30cycles |
退火 | 55-65℃ | 30s | ||
延伸 | 72℃ | 1-2kb/min | ||
终延伸 | 72℃ | 5min |
4.结果检测:
反应结束,取5ul反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。