DNA无缝连接酶
1. 产品信息：
| 产品目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| D008-25 | DNA无缝连接酶 | 125μl（25次） | ￥375 |
| D008-50 | DNA无缝连接酶 | 250μl（50次） | ￥650 |
| D008-100 | DNA无缝连接酶 | 500μl（100次） | ￥980 |
2. 概述：
DNA无缝连接酶是一种能够快速将两个或者两个以上的首尾有短重叠序列的DNA分子连接起来的酶体系，由于其只对末端有重叠序列的DNA分子起作用，它具有定向，定顺序的特点，同时也是一种简单、快速并且高效的DNA无缝克隆技术。DNA无缝连接酶能通过识别DNA片段和线性化载体末端20个左右的碱基的同源序列来将多个线性DNA片段定向克隆到目的载体上。由于它不具有序列特异性，通过一定的设计，可以将片段无缝克隆到载体的任意位置，而不用受到限制性内切酶位点的限制。该试剂操作简单，反应迅速，成功率高，是实验室克隆工作的一个有力的工具。操作上只需将线性化载体和目的片段按一定比例混合后，通过DNA无缝连接酶的催化，仅需反应15-30min即可完成反应，实现定向克隆。
3. 产品组成：
| 组分 | 25rnx | 50rnx | 100rnx |
|---|---|---|---|
| DNA无缝连接酶 | 125μl | 250μl | 500μl |
| Control DNA Mix | 15μl | 15μl | 15μl |
性DNA彼此间有20bp的重叠区域，因此在重组构建酶的作用下可以首尾连成环状DNA分子，转化细菌后在Xgal/IPTG培养基
上呈现白色菌斑。而在未加重组构建酶的情况下直接转化细菌，仅会有极少数背景的蓝色菌斑生长。
3. 保存条件：
- 20℃保存,使用过程中避免反复冻融。4. 技术手册：
DNA无缝连接酶 设计与操作手册5. 应用案例：
目标：将3个片段（片段1：500bp；片段2：1000bp；片段3：1500bp）一次重组克隆到pUC57载体的EcoRI和HindIII位点之间。
方案设计：
按照技术手册的介绍设计3个片段之间以及片段与载体之间的重叠序列，DNA无缝连接酶会按照设计的顺序将他们连接起来。设计的序列简图如下图所示：
将反应产物转化大肠杆菌，37度培养过夜后，克隆生长情况如下图：
| 载体 + 无缝连接酶 | 载体 + 片断 + 无缝连接酶 |
用载体上的引物PCR扩增插入的片断，检测克隆是否含有预计大小的DNA片断。并将克隆进行培养，提取质粒，单酶切线性化以判断质粒大小。
| PCR扩增插入片断（左边两个为蓝色克隆PCR结果，其余为白色克隆） | 克隆进行培养，抽提质粒后酶切判断质粒大小（左边两个为蓝色克隆结果，其余为白色克隆） |
以上结果显示所挑取的14个白色克隆均含有预定大小的插入片断，所挑取的克隆的阳性率为１００％。
测序结果证实克隆所含有的片断与设计的序列完全一致（数据这里没有展示）。