一. 试剂盒组成:
| 产品目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 4302A | 2x SYBR Green qPCR Master Mix(Antibody,with ROX) | 1ml（100次x 20µl） | ¥??? |
| 4302B | 2x SYBR Green qPCR Master Mix(Antibody,with ROX) | 5ml（500次x 20µl） | ¥??? |
二. 产品介绍：
本体系是用于染料法（SYBR Green I）实时荧光定量的预混体系。产品含有优化浓度的HotStart Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，适用于不同类型荧光定量PCR。
本体系为2×SYBR Green qPCR(Antibody)专用预混液，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为1×,即可进行反应。精心研制的抗体法热启动Taq酶，配合反复优化的Buffer，增强了在低浓度和复杂模板上的扩增效率，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。
同时本产品提供ROX Reference Dye用于校正加样孔之间的体积误差和荧光信号误差，不用Reference Dye校正的qPCR扩增仪器，使用时无需添加ROX。
三. 产品特点：
1. 适用于2×SYBR Green PCR专用预混液，可以快速，准确地对目的基因进行分析，如基因表达分析，拷贝数分析，适用于不同类型荧光定量PCR。
2. 即用型2×预混荧光定量mix，PCR反应配置时，只需加入预先设计好的上下游引物，模板和灭菌蒸馏水即可进行反应，使用方便。
3. 94℃ 2min完全热启动，完全避免了非特异性反应的发生，配合反复优化的Buffer，增强了在低浓度和复杂模板上的扩增效率，具有扩增效率高，扩增灵敏度高，扩增特异性好等特点。
四. 注意事项：
1． 50×ROX Reference Dye用于校正加样孔之间的体积误差和荧光信号误差，不用Reference Dye校正的qPCR扩增仪器，使用时无需添加ROX。
2． 使用于以下荧光定量仪器，50×ROX Reference Dye使用方法如下：
| 仪器名称 | 使用终浓度 |
|---|---|
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT和StepOne / StepOne Plus 等 | 终浓度1× |
| ABI 7500/7500 Fast，Agilent Mx3000P/Mx3005P/Mx4000等 | 终浓度0.1× |
| Roche仪器，Bio-Rad仪器，Eppendorf仪器，FS福生仪器等 | 无需添加 |
3． qPCR实验时，在配置反应孔Mix之前，每1ml Mix中加入40ul 50×ROX或者4ul 50×ROX(qPCR实验仪器型号决定加入体积），用1ml移液器轻轻混匀。
4． 解冻2 x SYBR Green qPCR Mix(Antibody)，上下颠倒轻轻混匀混合，避免气泡，瞬时低速离心后使用。
5． 反应液的配置分装，务必使用无污染的新吸头，EP管，尽量避免污染。
五. 使用方法：
1． 反应液的配置分装，务必使用无污染的新吸头，EP管，尽量避免污染。
2． 溶解所有用到的试剂，轻柔上下颠倒混匀，短暂瞬时离心将溶液甩至管底；
3． 按下列组份配制qPCR混合液，将除模板以外的试剂混成mix，再分装到单个PCR管内，最后加入模板DNA。
| PCR体系 | 体积(10µl体系) | 体积(20µl体系) |
|---|---|---|
| 模板 | 1-2 µl | 1-2 µl |
| 上游引物（10µM） | 0.25μl | 0.5 µl |
| 下游引物（10µM） | 0.25μl | 0.5 µl |
| 2 x SYBR Green qPCR Mix(Antibody) | 5 µl | 10 µl |
| DEPC-ddH2O | X µl | X µl |
| 总体积 | 10 µl | 20 µl |
4． 短暂瞬时离心后放入荧光定量PCR仪中运行，qPCR反应程序如下：
| 两步法流程: | 循环数 | 温度 | 时间 |
|---|---|---|---|
| 预变性 | 1x | 94℃ | 2 min |
| 变性 | 40-50x | 94℃ | 15 sec |
| 退火-延伸 | 60℃ | 30 sec |
*当两步法扩增效率不好的时候建议选择三步法进行qPCR反应。
| 三步法流程* | 循环数 | 温度 | 时间 |
|---|---|---|---|
| 预变性 | 1x | 94℃ | 2 min |
| 变性 | 40-50x | 94℃ | 15 sec |
| 退火 | 60℃ | 15 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec |