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基因突变文库构建服务

DNA突变文库被广泛的应用于蛋白质工程改造、蛋白结构和功能研究、抗体工程和人源化、蛋白质进化等领域。基源生物提供多种样式的定制化DNA文库以满足客户的不同需求。我们的资深科学家会为您特异化的需求设计最合理实验策略。.

文库基本类型:

1. 复合文库
复合文库是由多个单独的订单突变体组成,。每个突变体是分开的克隆,可以以独立的分开的克隆交付,也可以以混合的形式进行交付。复合文库的优点是每一个克隆的序列信息是已知的和明确的,为后期的筛选提供了明确的信息。举个例子,某个文库需要对某少数氨基酸进行有限的突变,其突变的组合数为100。我们可以将这100种突变体进行分别构建,形成100个单独的突变克隆。以100个克隆交付或者以一个混合的形式进行交付。


2. 随机文库
随机文库是利用易错聚合酶在聚合DNA的过程中随机引入突变的特点,或者在普通聚合酶反应中添加增加突变率的添加剂,来产生很多随机的突变分子的文库。通过控制反应条件可以基本控制每个分子上的平均突变数。突变的区域可以是整条基因或者是突变集中于基因的某个区域。突变分子经过克隆到细菌中产生随机突变文库克隆,我们提供的文库克隆可以高达109克隆。


3. 多样化文库
多样化文库为将蛋白质的某一个或几个氨基酸多样化成其他的一个或几个氨基酸。多个多样化位点和每个位点突变成多个氨基酸,因此组合成一个组合文库。如某蛋白质需要将其中的5个氨基酸残基都同时突变成其他的19种氨基酸残基。因此理论上构成了195=2.4x106种不同的突变分子。我们不仅可以控制每个突变点需要突变成氨基酸类型和个数,而且可以控制每种氨基酸在每个点所占的比例,以为后期的筛选工作提供便利。


应用:
1. 研究蛋白质功能结构域
2. 产生需要的DNA序列(酶切位点,GC含量等)
3. 寻找和改变酶蛋白的氨基酸残基关键位点,以此改变酶的特性(底物特异性、最适PH、稳定性等)
4. 多样化蛋白质序列
5. 蛋白质序列扫描
6. 多样化抗体结合位点,寻找更高的结合特性
7. 人源化抗体
8. 其他的任何需要随机改造蛋白序列的应用

技术指标:

1. 复合文库:每个克隆100%测序确认,克隆可以以混合物或者单个克隆形式发货
2. 随机文库:平均突变数可以被控制在1-20个突变点/kb
3. 交付PCR产物或者克隆文库
4. 高的克隆效率保证95%的克隆含有目标基因序列(复合文库除外)
5. 文库均一性<15(每个突变分子的丰度差异较小)

交付和周期:
1. 复合文库:质粒DNA或者单独的克隆
2. 随机文库和多样化文库:文库质粒DNA和文库克隆混合菌液